克隆感受態(tài)細胞主要采用理化方法誘導細胞，吸收周圍環(huán)境中的DNA分子，使其處于最適攝取和容納外來DNA的生理狀態(tài)。它的主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源基因或載體進入感受態(tài)細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。

 

　　克隆感受態(tài)細胞操作方法：

　　1、DH5α感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰中靜置25分鐘；

　　2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率；

　　3、向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘；

　　4、5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上；

　　5、將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

 

　　注意事項：

　　1、感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率；

　　2、混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作；

　　3、轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。